氰化物是连续流动含氰基的一类化合物的总称,是分析法测广泛存在于自然界的剧毒物质,可抑制组织细胞生物氧化酶活性,定杏阻滞三羧酸循环,仁中造成“细胞内窒息”。氰化生活中氰化物中毒以口服为主(如误食含氰果仁)。连续流动GB5009.36—2016《食品安全国家标准 食品中氰化物的分析法测测定》中提及的定量检测方法主要有分光光度法及气相色谱法,但并未包含杏仁中的定杏氰化物检测。在食品监测工作中,仁中杏仁中氰化物的氰化检测一般采用气相色谱法,但该方法精密度偏差过大且偏差方向难控,连续流动方法中因试剂等影响造成批次间电子俘获(ECD)响应重复性差。分析法测目前连续流动仪测定氰化物的定杏方法广泛应用于职业卫生检测、环境检测及食品检测等众多领域。仁中韦小烨等建立的氰化鲜木薯中氰化物的流动注射测定法线性范围宽、重复性好,对于油脂含量较少的样品,可以直接水解提取,取上清液过滤后进行分析。然而,对于含有大量油脂的样品,如杏仁,如何在前处理过程中除去干扰,同时做到高回收率及高精密度等结果的测定方法尚未见报道。结合食品监测方法及部分研究成果,研究人员建立了连续流动分析仪测定氰化物的方法,杏仁样品经前处理后,仪器密闭蒸馏出氢氰酸,与氯胺T反应生成氯化氰,以异烟酸–巴比妥酸作染料,代替异烟酸–吡唑啉酮规避苯甲醛与吡唑啉酮反应产生白色混浊的干扰,生成物于600nm处比色定量。笔者建立连续流动分析法测定杏仁中的氰化物,采用正己烷萃取除去油脂,滤膜过滤除去固体颗粒,拓展了杏仁中氰化物检测的方向。
连续流动分析仪:SKALARSAN5000型,带有四针自动进样器及循环冷却水系统,荷兰SKALAR公司。气相色谱仪:安捷伦7890A,带有CTC顶空进样器及ECD检测器,美国安捷伦科技公司。超声清洗仪;KQ2200DB型数控,昆山超声仪器有限公司。电子分析天平:AL204–IC型,感量为0.001g,瑞士梅特勒–托利多公司。低温冷冻离心机;SIGMA2–16K型,德国希格玛公司。氰化物标准溶液:50mg/L,编号为GBW(E)080115,中国计量科学研究院。水相针式滤器(聚醚砜):13mm×0.45μm。氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、氯胺T、1,3-二甲基巴比妥酸、异烟酸、正己烷:分析纯,国药集团化学试剂有限公司。盐酸:分析纯,天津市大茂化学试剂厂。月桂醇聚氧乙烯醚(Brij35):CAS号为9002–92–0,荷兰SKALAR公司。实验用水为超纯水。
pH5.2的缓冲溶液:称取氢氧化钠2.3g溶解于500mL超纯水中,加入20.5g邻苯二甲酸氢钾,加超纯水至975mL后,分别用1mol/L的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH至5.2,定容至1L后加入1mL月桂醇聚氧乙烯醚,充分溶解后过滤,于棕色瓶中冷藏,待用。
氯氨T溶液:称取氯胺T2.0g,用超纯水定容至1000mL,过滤后使用。
显色剂:称取氢氧化钠7g于约500mL超纯水中,再加入1,3-二甲基巴比妥酸16.8g、异烟酸13.6g,加入970mL超纯水溶解,用1mol/L的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH至5.2。
氰化物系列标准工作溶液:吸取2mL氰化物标准溶液于50mL容量瓶中,用超纯水定容至标线,得2.0mg/L氰化物标准溶液,再分别吸取0、0.25、0.50、1.0、1.5、2.5、5.0、12.5mL上述2.0mg/L氰化物标准溶液于比色管中,用超纯水定容至25.0mL,配制成氰化物质量浓度分别为0.02、0.04、0.08、0.12、0.20、0.40、1.00、2.00mg/L的系列标准工作溶液,现用现配。
低温下准确称取1.000g(精确至0.001g)已粉碎均匀的样品于样品管中,加入约40mL的超纯水,立即盖紧密封,超声提取3次,每次提取10min,每次提取间隔为1h,以防止其内部液体温度过高产生膨胀,继而顶出密封盖,从而造成样品损失。于25~40℃放置48h,使样品充分水解(应充分振摇,使样品无结块,振摇时应按住样品管盖,防止样品溢出),再把样品管放入冰箱于4℃冷藏2h后,以10000r/min冷冻离心10min,取出上清液,在样品管中加入超纯水10mL,振摇,冷冻离心,将取出的上清液合并后,加入10mL正己烷,充分振摇,静置分层后舍去正己烷,水层经过0.45μm的水系过滤膜过滤,滤液定容至100mL,加入氢氧化钠0.2g使氢氧化钠质量浓度为2g/L,冷藏,待混匀,待测。
称取6个均匀样品1.000g(精确至0.001g)于样品管中,分3个批次加入50mg/L氰化物标准溶液0.2、0.7、1.0mL,同1.3方法进行处理,分别得到质量浓度为0.1、0.35、0.5mg/L的加标样品。
进样时间:80s;冲洗时间:90s;探测峰起始值:0.01AbS;峰形宽度:30%(5%~100%);加热器温度:155、40℃;检测波长:600nm。
氢氧化钠的加入时机,分为在提取初和提取后加入。在提取初加入氢氧化钠可以更好的保留样品中氰化物的含量,但实际操作中,在提取初加入氢氧化钠易致使样品“胶质化”严重,溶液不易经0.45μm的水系过滤膜过滤,故选择在低温提取后加入氢氧化钠调节pH。
相关链接:邻苯二甲酸氢钾,3-二甲基巴比妥酸,聚氧乙烯醚,氢氧化钠
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